组蛋白去乙酰化酶抑制剂对急性移植物抗宿主病模型小鼠CD4+CD25+ Foxp3+细胞的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.49.007

摘要/Abstract

摘要：

背景：防治移植物抗宿主病，提高移植存活率是异基因造血干细胞移植急待解决的核心问题；因此寻找新的免疫抑制剂成为必要。近期的研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有免疫调节作用。

目的：通过建立小鼠急性移植物抗宿主病模型，观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对小鼠急性移植物抗宿主病的影响及免疫调节作用。

方法：选择C57BL/6(H-2b)→BALB/C(H-2d)作为完全异基因移植供、受体建立移植物抗宿主病小鼠模型，移植后3，5，7，9，11 d，治疗组小鼠腹腔注射组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA 35 mg/(kg•次)(0.2 mL)，对照组小鼠腹腔注射灭菌水0.2 mL/次，通过流式细胞术、实时定量PCR、病理学等方法，比较两组小鼠的急性移植物抗宿主病临床表现、生存时间及CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞百分率。

结果与结论：治疗组较对照组小鼠出现急性移植物抗宿主病时间推迟，程度减轻、生存时间延长。治疗组生存率显著高于对照组(P < 0.05)。移植后治疗组小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞阳性百分率随时间延长呈逐渐递增趋势；反之对照组小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞阳性百分率随时间延长呈逐渐递减趋势(P < 0.05)。提示SAHA可延迟急性移植物抗宿主病的发生，减轻急性移植物抗宿主病的严重程度，以上作用可能是通过提升CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的比例来实现的。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

全文链接：

关键词: 实验动物, 组织工程, 组蛋白去乙酰化酶抑制剂, 移植, 急性移植物抗宿主病, CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞

Abstract:

BACKGROUND: Prevention and treatment of graft versus host disease and elevation of graft survival rate are core problems needed to be solved in allogenic hematopoietic stem cell transplantation. Thus, it is necessary to find a new immunosuppressant. Recent studies showed that histone deacetylase inhibitor has immunomodulatory effects.

OBJECTIVE: To observe the effects of histone deacetylase inhibitor SAHA on acute graft versus host disease in mice and the immunomodulatory effects.

METHODS: C57BL/6(H-2b)→BALB/C(H-2d) was selected as donor and recipient of complete allotransplantation. At 3, 5, 7, 9 and 11 days after transplantion, mice in the treatment group were intraperitoneally given SAHA

(35 mg/kg) (0.2 mL). Mice in the control group were intraperitoneally given sterile water 0.2 mL/time. Flow cytometry, real-time quantitative PCR and pathology were used to compare the clinical manifestations, survival time and CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ cell percentage of acute graft versus host disease in mice of both groups.

RESULTS AND CONCLUSION: In the treatment group, the time of acute graft versus host disease was delayed and the extent was reduced and survival time was longer compared with the control group. Survival rate was significantly higher in the treatment group than in the control group (P < 0.05). After transplantation, the proportions of CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ cells gradually increased with prolonged time in the treatment group. On the contrary, the proportions of CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ cells gradually decreased with prolonged time in the control group (P < 0.05). Above data suggested that SAHA delayed the occurrence of acute graft versus host disease and lessened the severity of acute graft versus host disease possibly through elevating the proportion of CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ cells.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

全文链接：

Key words: hematopoietic stem cell transplantation, graft vs host disease, histone deacetylases, models, animal

中图分类号:

R318

朱婕琳，张鹏. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂对急性移植物抗宿主病模型小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的影响[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(49): 7908-7913.

Zhu Jie-lin, Zhang Peng. Histone deacetylase inhibitor affected CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ cells in a mouse model of acute graft versus host disease [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(49): 7908-7913.

图/表（结果） 3

2.1 实验动物数量分析 20只急性移植物抗宿主病模型小鼠随机分为治疗组及对照组，每组10只。因为移植后观察4周，至实验截止后处死全部受鼠，观察期内濒死小鼠即取组织送病检。

2.2 小鼠急性移植物抗宿主病评分及生存曲线变化

移植后第1周：治疗组与对照组均出现轻微的体质量下降。

移植后第2周：对照组小鼠均出现少食少动、消瘦、弓背、精神倦怠等急性移植物抗宿主病表现，本周内死亡小鼠4只；治疗组小鼠也出现上述症状，但程度较对照组轻微，本周内死亡小鼠1只。

移植后第3周：对照组小鼠急性移植物抗宿主病明显加重，出现严重弓背、活动度降低、脱毛、肛周出血等症状，本周内死亡小鼠3只；治疗组小鼠出现中度耸毛，活动度尚可，本周内死亡小鼠2只。

移植后第4周：对照组小鼠急性移植物抗宿主病仍呈进行性加重，本周内死亡小鼠3只；治疗组小鼠症状较第3周未有明显变化，本周内死亡小鼠1只。

治疗组与对照组小鼠急性移植物抗宿主病评分结果见表2，生存时间见图1。

2.3 小鼠肝脏、脾脏的病理学变化 治疗组小鼠病理表现较对照组病变轻。对照组主要病理改变：①肝脏表现为肝细胞肿胀变性，肝门静脉区大量分叶核细胞和淋巴细胞浸润及伴有局部片状性坏死；肝血窦和中央静脉扩张瘀血。②脾脏病变为脾小结结构破坏，边界不清楚(图2，3)。

2.4 CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞在外周血中阳性百分率变化

治疗组小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞阳性百分率移植后随时间延长呈逐渐递增趋势；对照组小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞阳性百分率随时间延长呈逐渐递减趋势。移植后+7 d SAHA治疗组小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例与对照组差异无显著性意义(P > 0.05)；移植后+14，21 d治疗组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例均高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05，见表3及图4)。

2.5 SAHA 对小鼠外周血Foxp3 mRNA表达水平的影响

采用公式2^??Ct计算治疗组与对照组小鼠外周血Foxp3 mRNA的相对表达水平，治疗组与对照组相比仍维持较高水平(0.85±0.20，0.26±0.10，P < 0.01)。

参考文献

[1] Stein A, Forman SJ.Allogeneic transplantation for ALL in adults.Bone Marrow Trans Plant. 2008;41(5):439-446.
[2] Bur Trk, Traynor AE, Craig R, et al. The promise of hematopoietic stem cell transplantation for autoimrnune diseases.Bone Marrow Transplant.2003;31(7):521-524.
[3] Morris ES, Hill GR. Advances in the understanding of Aeute graft-versus-host-disease. British J Haematol. 2007;137:3-19.
[4] Lamb KE, Lodhi S, Meier-Kriesche HU.Long-term remal allograft survival in the United States:a critical reappraisal. Am J Transplant. 2011;11(3):450-462.
[5] 曹江,曾令宇,李振宇,等.供体Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响[J].中国实验血液学杂志,2010,18(1): 181-184.
[6] Cooke KR,Kobzik L,Martin TR,et al. AnXEPerimentalModelof IdioPathic Pneumonia Syndrome After Bone Marrow TransPlnatation:I.TheRoles of Minor H Antigens and Endotoxin. Blood. 1996;8(8):3230-3239.
[7] Kelli PA,MaeDonal D,Vanessa R.Donor Pretreatment ProgeniPoietin-lIs superior to granuloeyte colony-stimulating factor in preventing graft-versus-hostdisease after allogeneie stem cell transplantation.Blood. 2003;101(5):2033-2042.
[8] Koh LP, Chao NJ. Nonmyeloablative allogeneic hematopoietic stem cell transplant using mismatched/haploidentical donors: a review. Blood Cells Mol Dis. 2008;40(1):20-24.
[9] 蔡芳芳,俞康,江松福.小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立[J].温州医学院学报,2009,39(4):320-324.
[10] Tsirigotis P,Qr R,Resnick IB,et al.Immunotherapeutic approaches to improve graft-versus-tumor effect and reduce fraft-versus-host disease. Immunotherapy. 2012;4(4): 407-424.
[11] 尹灵梅,陈黎. Tr1细胞免疫调控与移植物抗宿主病的研究进展[J].重庆医学,2014,43(5):622-625.
[12] Coghill JM,Ssrantopoulos S,Moran TP,et al. Effector CD4+Tcell,the cytokines they generate,and GVHD:something old something new.Blood. 2011;17(12):3268-3276.
[13] Brogdon JL, Xu Y, Szabo SJ, et al. Histone deacetylase activities are required for innate immune cell control of Th1 but not Th2 effector cell function.Blood. 2007;109(3): 1123-1130.
[14] Tao R,de Zoeten EF,Ozkaynak E,et al. Deacetylase inhibition promotes the generation and function of regulatory T cells. Nat Med. 2007;13(11):1299-1307.
[15] Matsuoka H, Fujimura T, Unami A, et al. Novel method for selecting immunosuppressive histone deacetylases inhibitors with minimal thrombocytopenia.Bio Pharm Bull.2008; 31: 305-308.
[16] Glauben R,Batra A,Fedke I, et al.Histone hyperacetylation is associated with amelioration of experimental colitis in mice. J Immunol. 2006;176:5015-5022.
[17] Miura Y,Thoburn CJ,Bright EC,et al.Association of FOXP3 regulatorygene expression with graft-versus-host disease. Blood. 2004;104(7):2187-2193.
[18] Leventhal J,Huang Y,Xu H,et al.Novel regulatory therapies for prevention of Graft-versus-host disease.Bio Med Central Med. 2012;10:48.
[19] Michael M,Shimoni A,Nagler A. Recent compounds for immunosuppression and expermental therapies for acute graft-versus-host disease. Isr Med Assoc J. 2013;15(1):44-50.
[20] Hippen KL,Riley JL,June CH,et al.Clinical perspectives for regulatory T cells in transplantation tolerance.Semin Immunol. 2011;23(6):462-468.
[21] Fonternot JD,Javin MA,Rudensky AY.Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+regulatory T cells. Nat Immunol. 2003;4(4):330-336.
[22] Hori S,Nomura T,Sakaguchi S.Control of regulatory T cell development by the transcription factor Foxp3.Science. 2003;299(5609):1057-1061.
[23] Rasheed W,Bishton M,Johnstone RW,et al. Histone deacetylase inhibitors in lymphoma and solid malignancies. Expert Rev.Anticancer Ther. 2008;8:413-432.
[24] Lee MJ,Kim YS,Kummar S,et al.Histone deacetylase inhibitors in cancer therapy.Curr Opin Oncol. 2008;20: 639-649.
[25] Reddy P,Sun Y,Toubai T,et al. Histone deacetylase inhibition modulates indoleamine 2,3-dioxygenase-dependent DC functions and regulates experimental graft-versus-host disease in mice. J Clin Invest. 2008;118:2562-2573.
[26] Schmidt K,Seeger K,Scheibenbogen C,et al. Histone deacetylase inhibition improves differentiation of dendritic cells from leukemic blasts of patients with TEL/AML1-positive acute lymphoblastic leukemia. J Leukoc Biol. 2009;85: 563-565.

引言

异基因造血干细胞移植是治疗多种血液系统恶性肿瘤、某些实体瘤、自身免疫性疾病及遗传性代谢疾病的最有效手段^[1-2]，尽管移植过程中有HLA配型及免疫抑制剂的应用，但急性移植物抗宿主病的高发生率和死亡率仍是异基因造血干细胞移植成功的最大障碍^[3]。针对急性移植物抗宿主病的形成过程，国内外学者倾注大量心血于移植物抗宿主病的防治研究，免疫抑制剂如环孢素、他克莫司、吗替麦考酚酯等可以减轻移植物抗宿主病，但仍有相当多的移植物抗宿主病患者对上述药物治疗无效，而且前述药物肝肾毒性大，其作用的位点是直接抑制T细胞的活化，长期应用有加重感染、诱导第二肿瘤发生的风险，且长期免疫进程中移植物排斥的发生不能完全防止^[4]。因此，防治移植物抗宿主病，提高移植存活率是异基因造血干细胞移植急待解决的核心问题；因此进一步寻找新的免疫抑制剂成为必要。

目前基于非基因序列改变所致基因表达水平变化的深入研究，组蛋白去乙酰化酶抑制剂作为一种调节基因转录过程物质，通过在转录后修饰组蛋白来调节基因转录和染色质装配，而成为了某些疾病治疗的新靶点。研究已证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过抑制组蛋白去乙酰化酶的活性，诱导靶细胞中组蛋白高度乙酰化，改变染色质结构，在转录水平进行基因表达调控，研究证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有诱导多种肿瘤细胞凋亡、分化和抑制增殖的作用，使特定基因激活表达，相应地导致细胞的末端分化或癌细胞的凋亡，目前组蛋白去乙酰化酶抑制剂用于治疗不同的实体瘤和血液恶性疾病已进行了Ⅰ-Ⅱ期临床研究阶段；随着对组蛋白乙酰化在基因转录调控中作用机制认识的深入，近期的研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂还具有免疫调节作用，体外实验表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂可抑制T淋巴细胞的活化、增殖及分泌细胞因子，利用自身免疫性疾病动物模型进行的研究也证实了其免疫抑制活性。

鉴于CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的功能，其数量的缺少和或功能的缺陷与多种临床疾病密切相关，而组蛋白去乙酰化酶抑制剂越来越深入的免疫调节功能的研究，从表观遗传学角度研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂与CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞之间的相互关系，能够更好地、更深入地了解组蛋白去乙酰化酶抑制剂的免疫抑制功能，从改变CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的表观遗传学水平帮助患者恢复机体CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的数量，重建其功能，为组蛋白去乙酰化酶抑制剂治疗炎症免疫性疾病甚至应用于器官移植带来希望。但由于组蛋白去乙酰化酶抑制剂对小鼠急性移植物抗宿主病及CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的影响尚未见相关报道，为了研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂在急性移植物抗宿主病防治中的作用和机制，作者通过建立小鼠急性移植物抗宿主病骨髓移植模型，予以组蛋白去乙酰化酶抑制剂干预后，观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂是否能降低急性移植物抗宿主病；探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂对受体小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的影响，通过探索组蛋白去乙酰化酶抑制剂在异基因造血干细胞移植中减轻移植物抗宿主病的作用和机制，为组蛋白去乙酰化酶抑制剂过渡到临床应用奠定基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程
全文链接：

材料方法

设计：对比观察动物造模实验。

时间及地点：于2009年10月至2010年6月在厦门大学动物实验中心完成。

材料：

实验动物：20只供鼠为雄性C57BL/6 (H-2b)小鼠，6-8周龄，体质量(20±1) g，SPF级，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。许可证号：SCXK(泸)2007-0005。

20只受鼠为雌性BALB/C(H-2d)小鼠，6-8周龄，体质量(20±1) g，购自厦门大学实验动物中心。许可证号：SCXK (闽)2007-0003。

方法：

实验动物分组：选择C57BL/6(H-2b)→BALB/C(H-2d)作为完全异基因移植供、受体建立移植物抗宿主病小鼠模型，按随机数字表法分为2组，每组10只。移植后3，5，7，9，11 d，治疗组腹腔注射组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA 35 mg/(kg•次)(0.2 mL)，对照组腹腔注射灭菌水0.2 mL/次。

移植前预处理：利用直线加速器放射治疗机给予受鼠6.0 Gy全身照射，剂量率3 Gy/min。

制备移植细胞^[5]：采用断颈处死法将C57BL/6供鼠处死，体积分数75%乙醇浸泡5 min，在超净台内无菌取脾脏、股骨、胫骨；用无菌培养基从胫骨和股骨中冲洗出骨髓，研磨脾脏，用200目呢绒网分别将骨髓细胞和脾细胞制备成单核细胞悬液，1 500 r/min，5 min离心后，用EZ-Sep^TM Mouse 1X淋巴细胞分离液1 500 r/min，5 min，离心，吸取淋巴细胞层；用RPMI 1640无菌培养基重选细胞，作为移植的骨髓单个核细胞和脾细胞，每只受鼠输入细胞体积为0.2 mL。

移植方法：BALB/C接受照射后6-8 h，经尾静脉分别注射0.2 mL脾、骨髓混合细胞悬液，其中含有骨髓单个核细胞1.8×10⁶、脾淋巴细胞1.6×10⁶。

急性移植物抗宿主病的判断：细胞移植后每天记录各组小鼠的生存期，超过30 d为长期生存；每日观察治疗组与对照组小鼠体质量改变、食欲、精神状态、活动度、皮肤完整性、腹泻等情况；观察有无出现急性移植物抗宿主病。急性移植物抗宿主病程度按照表1标准进行评分^[6-7]。

病理学观察：发生急性移植物抗宿主病的小鼠濒死前肝、脾、小肠送病检，观察各组织发生病理学改变的情况。标本用体积分数4%中性甲醛液固定，石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色，光镜观察各组织发生病理学改变的情况。

流式细胞仪检测外周血Treg细胞：于骨髓移植后+7，14，21 d，治疗组与对照组小鼠分别于眼球后静脉丛取血，流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比值。

实时定量PCR(SYBRGreen法)检测外周血Foxp3基因表达：根据GenBank提供的Foxp3 mRNA序列及管家基因β-actin系列设计引物。目的基因Foxp3(forkhead box P3)引物序列：P1：5’ -GCC CTC CTA GAT CAT ATC AT-3’ ；P2：5’-AGG GTT TGG GTT GAG TAA AT-3’，扩增片段长度为195 bp；管家基因β-actin引物序列P1：5’-CAT CCG TAA AGA CCT CTA TGC CAA C-3’；P2：5’-ATG GAG CCA CCG ATC CAC A-3’，扩增片段长度为149 bp。

治疗组与对照组小鼠分别于眼球后静脉丛取血，严格遵循血液RNA提取试剂盒说明书的流程进行；采用相对定量法分析治疗组与对照组小鼠外周血Foxp3基因相对mRNA表达水平，计算公式：2^-^??Ct，其中?Ct= Ct_(Foxp3)- Ct_(β-actin)。

主要观察指标：①小鼠急性移植物抗宿主病评分、生存曲线。②小鼠肝脏、脾脏的病理学变化。③SAHA 对小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的影响。

统计学分析：统计学处理者为第一作者。数据统计分析采用SPSS 13.0统计软件包进行处理，实验所得数据以 x(_)表示，多组间比较采用One-way ANOVA统计方法分析；采用析因方差分析分别对治疗组与对照组的外周血的Foxp3基因表达变化差异进行统计分析。一个因变量与多个自变量间的线性数量关系用linear regression进行逐步回归统计分析。P < 0.05为差异有显著性意义。±s

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

全文链接：

讨论

随着造血干细胞移植广泛被用于各种血液疾病的治疗，移植后移植物抗宿主病成为研究的热点。临床上采用纯化CD34⁺造血干细胞移植(移植前去除移植物中的淋巴细胞)或部分去T淋巴细胞移植，在一定程度上减轻了移植物抗宿主病，但肿瘤的复发率增高^[8]。在本实验中，选用BALB/C和C57BL/6分别作为供受者，建立诱导急性移植物抗宿主病模型，因为两者的H-2抗原完全不同，为MHC不相合移植，与人类同种移植特点接近^[9]。

移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植的主要并发症，大多数接受异基因造血干细胞移植的患者都会有不同程度的移植物抗宿主病，表现为多系统损害(皮肤、食管、胃肠、肝脏等)的全身性疾病，是造成死亡的重要原因之一，因而移植物抗宿主病是目前困扰异基因GSCT移植成功的主要障碍^[10]。目前的研究认为移植物抗宿主病是供者T细胞对受者靶器官发生的免疫攻击效应^[11]，而CD4⁺ T淋巴细胞起了重要的作用^[12]。

针对急性移植物抗宿主病形成过程的不断深入研究，组蛋白去乙酰化酶抑制剂逐渐倍受关注，随着对组蛋白乙酰化在基因转录调控中作用机制认识的深入，近期的研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂还具有免疫调节作用。体外实验表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂可抑制T淋巴细胞的活化、增殖及分泌细胞因子，利用自身免疫性疾病动物模型进行的研究也证实了其免疫抑制活性，Brogdon等^[13]在BALB/C(H-2d)和DO11.10小鼠来源免疫细胞实验中显示LAQ824能抑制巨噬细胞和树突状细胞诱导的单核细胞活化，抑制Th1效应细胞，但是对Th2细胞无抑制作用。Tao等^[14]在输注CD4⁺CD25^- T细胞于免疫缺陷小鼠后，使用曲古抑菌素A显示组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够增强调节性T细胞介导的对T细胞稳态增殖的抑制。Matsuoka等^[15]在大鼠异位心脏移植模型中，分别通过不同途径给予9种组蛋白去乙酰化酶抑制剂化合物均延长了大鼠移植物存活时间，证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂在大鼠异位心脏移植中的免疫抑制作用。在实验性结肠炎模型中，口服给予VPA和SAHA能够抑制硫酸葡聚糖诱导的结肠炎^[16]。Miura等^[17]检测34例异基因造血干细胞移植后不同时期外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达，发现移植物抗宿主病的严重程度与Foxp3 mRNA 的表达呈负相关，一些患者Foxp3 mRNA的高表达与移植物抗宿主病的好转有密切关系。现在也有报道使用CD4⁺CD25⁺Foxp⁺调节性T细胞预防移植物抗宿主病^[18-20]。

本实验中治疗组小鼠出现急性移植物抗宿主病时间推迟，程度减轻，生存时间明显延长，实验结束后，作者通过检测治疗组与对照组受鼠器官脏器的病理学改变情况，发现治疗组病变程度较对照组较为轻，淋巴细胞浸润程度较对照组减轻，提示SAHA能有效减轻移植物抗宿主病的临床表现及严重程度，进一步证实SAHA可以抑制炎症反应，避免靶器官发生免疫攻击效应，提高造血细胞移植的存活率。说明运用SAHA对移植后受鼠进行干预，对于减轻移植后移植物抗宿主病是有效、可行的。

近期的体外实验表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂可抑制T淋巴细胞的活化、增殖及分泌细胞因子，利用自身免疫性疾病动物模型进行的研究也证实了其免疫抑制活性，动物试验以及临床试验都证明了组蛋白去乙酰化酶抑制剂在异体移植中具有促进移植物存活和减轻移植物抗宿主病的作用。而Foxp3作为在诱导和维持异基因造血干细胞移植后免疫耐受和抑制移植物抗宿主病的发生中发挥重要作用的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的特异性标记，已于2003年被Fonternot等^[21-22]研究小组所证明，即：①Foxp3在Treg细胞上特异性表达，且Foxp3在Treg的发育和功能上是必需的。②Foxp3基因位于人染色体Xp11.23-Xp13.3，含有11个外显子，在人类中高度保守。故SAHA与Foxp3之间有无相关性，是否通过SAHA的干预，从而促进Foxp3的表达而减轻急性移植物抗宿主病的程度，至今为止国内外未有相关的报道。作者通过每周行流式细胞仪分析治疗组与对照组小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺变化，结果表明SAHA可促进外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺阳性百分率的升高。此外，作者还通过RT-PCR分别检测治疗组和对照组小鼠外周血Foxp3 mRNA表达情况，发现治疗组Foxp3 mRNA表达量均高于对照组，说明SAHA可能通过提高Foxp3的表达，而起到减轻急性移植物抗宿主病的发生，提高移植鼠的存活率。

由于组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过抑制组蛋白去乙酰化酶的活性，诱导靶细胞中组蛋白高度乙酰化，改变染色质结构，在转录水平进行基因表达调控。研究已证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有诱导多种肿瘤细胞凋亡，分化和抑制增殖的作用^[23-24]，而随着对组蛋白乙酰化在基因转录调控中作用机制认识的深入，除了明确的抗肿瘤活性，近期的研究发现有些组蛋白去乙酰化酶抑制剂还显示出对免疫应答具有调节作用^[25-26]。所以由于目前对急性移植物抗宿主病缺乏有效的治疗方案，而组蛋白去乙酰化酶抑制剂在转录水平发挥作用，与现有的免疫抑制剂不同，从而为急性移植物抗宿主病的治疗提供了一个新的思路，为移植后恶性血液病患者的急性移植物抗宿主病治疗提供更为理想的选择。